對(duì)生命現(xiàn)象中各種重要基因功能的研究，經(jīng)常需要把這些基因在大腸桿菌、酵母等體系中表達(dá)并純化蛋白。將所培養(yǎng)的大腸桿菌細(xì)胞（2升）離心并用小體積（～25毫升）溶液重懸。通過(guò)使用PhD高壓均質(zhì)機(jī)（D-3L），在15000Psi壓力下經(jīng)過(guò)一次破碎,即可達(dá)到超過(guò)95%以上的破碎率，并且通過(guò)外接的冷卻循環(huán)系統(tǒng)可以保證菌液在低溫下破碎，更好的保障了目標(biāo)蛋白的結(jié)構(gòu)及功能的完整性。
該實(shí)驗(yàn)結(jié)果對(duì)于我們順利發(fā)表文章是非常重要的:(Wang et al., 2016. Efficient Inactivation of Symbiotic Nitrogen Fixation Related Genes in Lotus japonicus Using CRISPR-Cas9. Front. Plant Sci., http://dx.doi.org/10.3389/fpls.2016.01333)。
同時(shí)，在另外一個(gè)待發(fā)表的課題中，我們利用D-3L高壓均質(zhì)機(jī)，在低溫下破碎萊茵衣藻（Chlamydomonas reinhardtii）,也得到了很高的破碎效率（>95%）。與之相比，超聲法破碎裂解衣藻細(xì)胞的效率比較低（經(jīng)過(guò)多次破碎，還有約50%左右的細(xì)胞保持了結(jié)構(gòu)的完整），而且耗時(shí)較長(zhǎng)、且往往伴隨局部過(guò)熱現(xiàn)象。
綜合比較，研究人員發(fā)現(xiàn)，在實(shí)驗(yàn)中通過(guò)使用PhD高壓均質(zhì)機(jī)處理多種不同樣品一般都可以較好的破碎效果。
